特异性免疫球蛋白 Y 治疗急慢性咽炎的疗效观察

谢民强　蒙永祥 　李仲汉 　李永奇 　张扣兴 　赵晓明 　熊国军 　陈勇明

     【摘要】　目的　评价特异性免疫球蛋白 Y 治疗急慢性咽炎的有效性和安全性。 方法　50 例单独接受特异性免疫球蛋白 Y 喷剂或同样剂量安慰剂治疗的成人急性咽炎采用随机双盲、安慰剂对照分组;另外急、慢性咽炎各25 例开放试验组单独接受特异性免疫球蛋白 Y 喷剂治疗。 疗程均为 7 d,急性咽炎治疗 3 d 后如症状无改善或加重者视为无效, 并加用抗生素治疗。 以症状、体征记分, 按显效、有效、无效评价疗效。 结果　双盲组中, 接受 IgY 治疗患者显效 8 例(32%), 有效 13 例(52%), 无效 4例(16%);安慰对照者显效 2 例(8%), 有效 5 例(20%), 无效 18 例(72%), 两组比较差异有非常显著性(χ2 =16.06, P<0.01)。 开放试验组中, 显效 19(38%)例, 其中急性占 14 例, 有效 23(46%)例, 急性占 10 例, 无效 8(16%)例, 急性占 1 例, 急慢性两组比较疗效差异有显著性。(χ2=8.90, P <0.05), 随访 3个月未发现毒副作用及过敏反应。 结论　特异性 IgY 口腔喷剂治疗急慢性咽炎安全、有效, 对急性咽炎的疗效优于慢性咽炎。

     【关键词】　咽炎;　免疫球蛋白类;　随机对照试验;　革兰氏阳性菌

Effect of specific immunoglobulin Y in the treatment of acute and chronic pharyngitis 　XIE Min-qiang＊ ,MENG Yong-xiang , LI Zhong-han, LI Yong-qi , ZHANG Kou-xing , ZHAO Xiao-ming,XIONG Guo-jun, CHEN Yong-ming＊Department of Otorhinolaryngology , Third AffiliatedHospital, Sun Yet Sen University , Guangzhou 510630 , ChinaCorresponding author:XIE Min-qiang, Email :min_qiang_x @hotmail.com

    【Abstract】　Objective　To evaluate the effect and safety of the specific immunoglobulin Y (IgY)fortreatment of acute and chronic pharyngitis.Methods　Double-blind, randomized, placebo-controlled trialwas conducted on 50 adults with acute pharyngitis.Experimental group received a 6 times-daily total 30doses of IgY stomat-spray which contained specific immunoglobulin Y (titer=512)prepared from the eggyolk of hensimmunized with a variety of bacteria.Another open label trial included 50 patients, whose agesranged from 21-69 years, including 25 cases of acute pharyngitis and 25 cases of chronic pharyngitis werealso treated using gYstomatspray.Thetherapeutic effect were objectively evaluated 7 days later by thedecreased scores based onboth the symptomsandphysicalsigns.If the symptom did not improve or becamesevere three days later, these patients with acute pharyngitis wasinefficiency and antibiotic medicine would be added to them.Results　In Double-blind trial, 8 cases(32 %)received IgY had apparent effect with the decreased scores 5 or more than 5, 13 cases(52%)had effective with the decreased scores 3-4, and other 4 cases(16%)had inefficacy with the decreased scores only 2 or no more than 2.While in placebo-controlled group, only 2 (8 %)cases had apparent effect, 5(20%)casesshowed effective and 18(72%) cases had noeffect.The difference between the two groups was significant (χ2=16.06, P <0.01).Inopen label trial, 19 cases(38%)showed apparent effect, in which 14 cases were acute pharygitis.23 cases(46%)had effective, in which 10 caseswere acute pharyngitis.The left 8 cases(16%)hadineffective, inwhich one case was acute pharyngitis.There was significantly difference (χ2=8.90, P <0.05)betweenacute pharyngitis and chronicpharyngitis.An average of three months followup showed that there were noside effect or toxic effect and no allergic reaction.Conclusion　The IgY stomat -spray is a safe and effective agent in treating acute and chronic pharyngitis, especially for acute pharyngitis.

作者单位:510630 广州, 中山大学附属第三医院耳鼻咽喉科(谢民强、李仲汉、李永奇);广东省大日生物化学药业有限公司(蒙永祥);广州中山大学附属第三医院呼吸内科(张扣兴);暨南大学医学院附属第三医院耳鼻咽喉科

(赵晓明、熊国军);广东省顺德市人民医院耳鼻咽喉科(陈勇明)

· 112 ·

中华耳鼻咽喉科杂志 2004 年2 月第 39 卷第 2 期　Chin J Otorhinolaryngol, February 2004, Vol 39, No .2

　　【Key words】　Pharyngitis;　Immunoglobulins;　Randomized controlled trials;　Gram-positive

bacteria

　　   急慢性咽炎是耳鼻咽喉科常见病, 部分为细菌感染引起,也与局部免疫状态有关。虽然急性期应用抗生素治疗有肯定的效果, 但本病常反复发作, 而且转变为慢性则治疗十分棘手 。我们自 2002 年 7月开始采用抗生素替代物———特异性免疫球蛋白 Y口腔喷剂治疗急慢性咽炎 ,效果满意,报告如下。

资料与方法

        一 、病例资料

        2002 年 7 月 ～ 2003 年 4 月中山大学附属第三医院耳鼻咽喉科 、暨南大学医学院附属第三医院耳鼻咽喉科和广东省顺德市人民医院耳鼻咽喉科门诊志愿受试患者, 所有纳入病例半月内未用抗生素, 不伴急性化脓性炎症, 体温不超过 38℃。除耳鼻咽喉常规检查外 ,加作血常规 、X 线胸部透视和咽拭子细菌培养 ,排除其他特殊感染,X 线胸部透视异常者不进入研究,总共 110 例 。其中 8 例在规定复查时间内失访,2 例自行合用了其他药而退出研究, 实际完成试验 100 例。急性发病 ,以咽痛为主 ,检查见咽黏膜急性充血或伴水肿 、溃疡者诊断为急性咽炎 ;慢性起病 ,咽异物感 、多痰 、咽痒、咽干、轻微咽痛, 检查见咽黏膜慢性充血 、表面黏液附着或淋巴滤泡增生者则诊断为慢性咽炎。50 例急性咽炎进行双盲试验 :男 30 例, 女 20 例;年龄 18～ 56 岁 ,平均 33.4 岁;病程 1 d 4 例, 2 d 12 例 ,3 d 26 例, 4 d 2 例 ,7 d 6 例 ;将所有临床资料编入观察表, 采用随机数字表法, 每个患者的观察表编号与厂家提供的药物编号一致 。另 50 例为开放试验组 :男 33 例 , 女 17 例 ;年龄 21～ 69 岁 ,平均 33.1 岁 ;其中急性咽炎或伴牙龈炎或伴溃疡 15 例, 慢性咽炎急性发作 10 例 ,病程 2 ～ 5d,作为急性咽炎组;慢性咽炎 25 例, 病程 3 个月～10 年,作为慢性咽炎组 ,两组给同样的已知治疗药。
        二、用药方法

       采 用 美 国 雅 臣 药 业 集 团 (Jason MedicalHoldings Inc .USA)和广东省大日生物化学药业有限公司联合研制的用葡萄球菌 、溶血性链球菌 、流感嗜血杆菌 、大肠杆菌等多种革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌和白色念珠菌免疫的鸡蛋黄中提取的特异性IgY, 制成水溶性薄荷味喷雾剂(效价为 512), 口咽喷入 ,每日喷 6 次,每次 5 喷, 喷入时深吸气, 喷药后10 min 内不饮水 , 不进食, 连用 7 d ,不合用其他任何治疗 ,安慰剂除不含 IgY 外与治疗药在剂型 、成分、颜色 、气味 、包装上完全相同, 治疗药与安慰剂由制药公司采用随机数字表法编号 , 该编号与受试病例编号一致。以症状、体征记分的方法评价疗效 ,急性咽炎治疗 3 d 后如症状无改善或加重者视为无效, 并加用抗生素治疗。试验结束后评价疗效 ,随机双盲试验由制药公司和参加试验单位一起开盲分组, 进行统计学处理 。开放试验的目的是比较急慢性咽炎的疗效差别, 制药公司 、参加试验的医务人员和受试患者对药物均知情 。

        三、记分办法

1.症状 :咽痛重 2 分, 轻 1 分 ;咽干 1 分;咽异物感 1 分;痰多 1 分;其他(咳嗽 、咽痒 、自觉咽喉烧灼感等)1分 。

2.体征 :咽部急性充血 2 分 ,慢性充血 1 分;有分泌物 1 分;其他(如黏膜肿 、牙龈肿、溃疡)1 分;体温升高 2 分;外周血白细胞升高 2 分;细菌培养有致病菌生长 2 分 。

3.疗效判断标准 :治疗后记分减少 5 分或以上者为显效 ;减少 3 分和 4 分者有效 ;等于或小于 2 分者无效。

        四、特异性 IgY 体外抑菌活性

        取中山大学附属第三医院急性呼吸道感染患者分泌物中分离的 92 株细菌进行特异性 IgY 体外抗菌活性测定,采用平板二倍稀释法 , IgY 效价分别为512 、256 、128 、64、32,质控菌株购自中国军事医学科学院 。
        五、IgY 电泳分析

        取常温保存和 55℃处理的 IgY 按效价 512 稀释, 聚丙烯酰胺电泳,考马斯亮蓝染色 。

        六、统计学方法

        行列表的卡方检验 。

        结 果

1. 用药后 2 d 开始起效 ,黏膜溃疡用药 3 d 后疼痛缓解 ,开放试验组用药前后症状体征变化详见图 1。按照上述疗效判断标准 ,用药 7 d 后, 随机试验组中, 治疗组总有效率84%, 安慰剂组总有效率
   
   

   图1　开放试验组 50 例急慢性咽炎特异性 IgY 治疗前后症状、体 征出现率变化 28%,安慰剂组中病程 7 d者占 4 例 ,两组疗效比较 差异显著(χ 2 =16.06 , P <0.01), 详见表 1;开放试 验组中, 急性组总有效率 96%, 慢性组总有效率 74%,两组疗效比较差异有显著性(χ 2 =8.90 , P < 0.05),详见表 2, 未发现毒副作用和过敏反应。
   

   
   

   2.慢性咽炎抽查血常规 17 例, 无 1 例异常 ;急 性咽炎抽查 17 例,6 例(35.3%)外周血白细胞数高 于 10×10 9 / L 。
   

   3.咽拭子培养 25 例 ,培养出 4 株致病菌 ,2 株 金黄色葡萄球菌 ,2 株铜绿假单孢菌, 其中 1 株金黄 色葡萄球菌对特异性 IgY 敏感。特异性 IgY 体外 抗菌活性见表 3。
   

   4.特异性 IgY 电泳结果(图 2):抗菌多克隆 IgY 具有 6条带, 相对分子量约为 31 000 ～ 66 000 , 常温和 55℃处理的标本带形基本一致, 表明 IgY 耐 热。
   

   
   

   
   

   
   

   
   

   注:MIC50 为 50%菌株被抑制的最小药物浓度, MIC90 为 90%菌株被抑制的最小药物浓度。 质控菌:肺炎双球菌(ATCC49619)效价 256, 金 黄 色 葡 萄 球 菌(ATCC29213)效 价 512, 大 肠 杆 菌(ATCC25922)效价 512

   讨 论

   　　早在 60 年代就发现鸡卵黄中存在免疫球蛋白G 抗体(IgG), 它是母鸡受抗原刺激后所产生的IgG ,在卵黄成熟期选择性地从血清中转移到卵黄(Yolk)内 ,因此又称 IgY,是卵黄中惟一的一类免疫球蛋白[ 1]含量与鸡血清中的 IgG 相近。后来的研究发现,用病毒或细菌免疫母鸡后特异性 IgY 的含量显著增高, 达到 9.4mg/ml 鸡蛋黄[ 2]但由于脂质体的影响, 当时分离纯化 IgY 很困难 。1980 年Polson 等 [ 3] 首先发现用 3.5 %聚乙二醇可将卵黄蛋白与脂质体分离后, 近 20 年来 IgY 的研究已取得了很大的进展[ 4 , 5]。特别是在免疫治疗方面, 由于鸡抗体耐酸[ 6]耐热 [ 2] ,性能稳定 ,不激活补体, 不与哺乳动物 Fc 受体结合 [ 7] , 因此不会导致由此引起的炎症反应 , 可局部应用预防或治疗口腔[ 8 , 9]或上呼吸道感染 。体外试验表明相应的 IgY 对肠道致· 114 ·中华耳鼻咽喉科杂志 2004 年2 月第 39 卷第 2 期　Chin J Otorhinolaryngol, February 2004, Vol 39, No .2病菌有抑制作用 [ 10] , 因此也可用于预防或治疗胃肠道感染[ 2, 7]。特别是 Sarker 等[ 11]采用抗轮状病毒鸡卵黄免疫球蛋白口服, 治疗婴儿轮状病毒感染所致腹泻, 获得了令人鼓舞的结果, 为 IgY 的临床应用提供了直接的证据, 但 IgY 的合适治疗剂量和抗体中和滴度的确定却是没有解决的问题 。我们根据92 株致病菌体外试验结果确定了 IgY 的有效治疗量,其效价不能低于 512
   

          急性咽炎和慢性咽炎急性发作主要表现为咽痛和咽充血 ,感染是其直接原因 ,常规治疗以全身抗感染为主。慢性咽炎症状多样, 病因复杂 ,无论慢性单纯性咽炎 、慢性肥厚性咽炎还是萎缩性咽炎, 局部黏膜感染性炎症仍然是其主要病理特征, 治疗方法虽然很多 ,但效果均不佳。本研究采用的口腔喷雾剂的有效成分是针对多种咽喉常见致病菌的多克隆抗体 IgY ,其抗菌机理是 IgY 与致病菌特异性结合后细菌表面结构改变, 阻断了细菌与人体细胞的黏附 ,细菌与宿主的物质交换受到影响 ,导致细菌生长抑制,这是特异性 IgY 的直接作用;同时细菌表面构象和(或)细胞膜电场的改变类似于免疫调理作用 ,便于宿主白细胞和巨噬细胞吞噬细菌, 这是特异性IgY 的间接作用。IgY 体外抗菌活性测定结果证实对常见致病球菌如金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎双球菌、A 群溶血性链球菌、肠球菌等有一定的抗菌作用, 其中以对肺炎双球菌、A 群溶血性链球菌抗菌活性最佳, 对卡他莫拉菌 、流感嗜血杆菌和标准菌株大肠杆菌亦有一定作用, 对其他球菌如本组培养出的一株耐药金黄色葡萄球菌也有部分抑制作用 ,但对其他革兰阴性杆菌均没有抗菌活性 。体外实验只反应了 IgY 的直接抑菌作用, 而在体内应用则具有上述双重作用。Carlander[ 12]最近研究发现, 19 例自愿受试者晚上用 IgY 溶液含漱 1 ～ 2min,第 2 日上午 18 例还能从唾液中检测到活性抗体,表明 IgY 可在局部滞留较长时间 。本组 50 例急性咽炎, 随机双盲研究结果显示 IgY 治疗的总有效率达到 84%, 远高于安慰对照(28 %), 也高于开放试验组中慢性咽炎的总有效率(74%), 提示特异性 IgY 对咽喉部急性细菌感染性黏膜炎症疗效较好。而且我们发现用药 3 d 后随咽部炎症控制 ,外周血白细胞也跟着下降 。但值得一提的是, 无论双盲试验还是开放试验, 急性咽炎治疗的显效率分别也只有 32%和 56%,因此对于较严重感染的患者则只能作为辅助治疗药物 。安慰组有效率较高 , 其中4 例就诊时已患病 7 d ,我们考虑可能系自然病程的影响 。

               特异性 IgY 是针对致敏的致病菌的 ,因此长期使用一般不会影响正常菌群生长。 正如 Sarker等 [ 11] 所指出的, 我们每日都吃鸡蛋 , 口服 IgY 是安全的 ,本组 100 例随访至今尚未发现任何毒副作用及过敏反应。肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌是成人慢性支气管炎急性发作和脓痰的常见病因, 本研究采用的特异性 IgY 对这些细菌敏感 , 我们在对伴发急性咽炎的这类患者应用该药治疗过程中发现患者咳嗽和脓痰很快控制 , 是否可作为辅助治疗药物尚待扩大病例进一步证实。

参 考 文 献

1 Loeken MR, Roth T F.Analysis of maternal IgG subpopulationswhich are transported into the chicken oocyte.Immunology , 1983,49:21-28.

2 Shin JH, Yang M , Nam SW, et al.Use of egg yolk-derivednoglobulin as an alternative to antibiotic treatment for controlof Helicobacter pylori infection.Clin Diagn Lab Immunol, 2002, 9:1061-1066.

3 Polson A , von Wechmar MB, van Regenmortel MH.Isolation ofviral IgY antibodies from yolks of immunized hens.ImmunolCommun, 1980, 9:475-493.

4 Gutierrez Calzado E, Garcia Garrido RM , Schade R.Humanhaemoclassification by use of specific yolk antibodies obtained afterimmunisation of chickens against human blood group antigens.Altern Lab Anim, 2001,29:717-726.

5 Tini M , Jewell UR, Camenisch G , et al.Generation andapplication of chicken egg-yolk antibodies.Comp Biochem Physiol AMol Integr Physiol, 2002, 131:569-574.

6 Lee KA, Chang SK , Lee YJ, et al.Acid stability of anti-Helicobacter pyroli IgY in aqueous polyol solution.J Biochem M olBiol, 2002, 35:488-493.

7 Carlander D , Kollberg H, Wejaker PE, et al. Peroralimmunotherapy with yolk antibodies for the prevention andtreatment of enteric infections.Immunol Res, 2000, 21:1-6.

8 Hatta H, T suda K , Ozeki M , et al.Passive immunization againstdental plaque formation in humans:effect of a mouth rinsecontaining egg yolk antibodies (IgY) specific to Streptococcusmutans.Caries Res, 1997, 31:268-274.

9 Smith DJ, King WF , Godiska R. Passive transfer ofimmunoglobulin Y antibody to Streptococcus mutans glucan bindingprotein B can confer protection against experimental dental caries.Infect Immun, 2001, 69:3135-3142.

10 Lee EN , Sunwoo HH, Menninen K , et al.In vitro studies ofchicken egg yolk antibody (IgY)against Salmonella enteritidis andSalmonella typhimurium.Poult Sci, 2002, 81:632-641.

11 Sarker SA , Casswall TH, Juneja LR, et al.Randomized, placebo-controlled, clinical trial of hyperimmunized chicken egg yolkimmunoglobulin in children with rotavirus diarrhea.J PediatrGastroenterol Nutr, 2001, 32:19-25.

12 Carlander D, Kollberg H, Larsson A.Retention of specific yolkIgY in the human oral cavity .Bio Drugs, 2002, 16:433-437.

(收稿日期:2003-05-13)

(本文编辑:何膺远)