段琳，赵文锋，丁建坤，吴梧桐，刘景晶

(中国药科大学生命科学与技术学院，江苏南京210009)

摘要：卵黄抗体(IgY)是禽类产生于血清中的免疫球蛋白，并在其受体介导下转移到卵黄中提供给新生个体被动免疫。IgY因其制备简单、成本低、可规模化生产，已被开发成功能食品、保健品、消毒剂等；诊断与治疗性lgY也将在临床上得到广泛的应用。

关键谒：卵黄抗俸：开发；I恪床应用

中图分类号：TQ464．7

文献标识码：A

文章编号：1005-167812010)03旬212-04

The present development status and application perspective ofegg-yolk antibody(IgY)

DUAN Lin，ZHAO Wen-feng，DING Jian-kun，WU Wu—tong，LIU Jing-jing

(School of L谵Science and Technology，China Pharmaceutical University，Nanjing，2 1 0009，China)

卵黄抗体(IgY)又称卵黄免疫球蛋白，在特异性抗原刺

激下由禽类B淋巴细胞产生并转移到卵黄中的多克隆抗体。lgY以其性质稳定、特异性强、制备简单、成本低、可规模化生产而倍受关注。目前已有大量添加lgY的产品如发酵酸奶、功能性食品、卫生消毒产品及化妆品等上市销售。lgY应用于医疗诊断及治疗通过临床验证也显示出良好效果。lgY的应用范围不断扩大，可以作为亲和配基，催化抗体等。本文就IgY的作用机理、开发现状、临床应用进行综述。

l

IgY及其作用机理

IgY是由特异性抗原免疫禽类，产生于卵黄中的_y免疫球蛋白。1893年Klemperer用试验首次证明特异性抗原免疫鸡后。抗体会转移到卵黄中。Leslie和B．Clemlgy(1969)提出卵黄中的抗体以IgY表示。20世纪80年代以来IgY开始广泛应用，lgY技术即lgY的制备和应用也逐渐成熟。IgY的制备包括选择抗原、佐剂、免疫方案(抗原剂量、免疫方式、次数和间隔期等)以及IgY的分离、纯化与储存。在实际应用中．19Y被制成卵黄粉或精制成抗体注射液。

lgY在食品、医药、生物等方面的应用越来越广泛，其作用机理逐渐被阐明和完善。口服IgY已被证明能有效替代抗生索治疗因耶尔森菌、肠毒性大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、幽f】螺杆菌等感染引起的胃肠道疾病。抗肠道细菌lgY

可能主要通过以下作用环节达到抗菌的作用⋯：特定病原菌

lgY能直接黏附于病原菌的细胞壁上，抑制病原菌的生长；

针对病原菌的菌毛和鞭毛lgY可黏附于细菌的菌毛和鞭毛

上，使病原菌不能黏附于肠道黏膜上皮细胞，妨碍其运动、游

走；一部分IgY在肠道消化酶作用下。降解为可结合片段，被

肠道吸收后进入血液能与特定病原菌黏附因子结合，使病原

菌不能黏附易感细胞而失去致病性。IgY也显示较好的抗

真菌、抗病毒效果。白色假丝酵母菌是条件致病真菌，能够

导致口腔和阴道黏膜感染。抗白色假丝酵母菌lgY可与白

色假丝酵母菌特异性结合，抑制其游动、生长和繁殖；阻断白

色假丝酵母菌黏附素与机体组织、细胞中的受体结合；在无

血清的环境中抑制白色假丝酵母菌生物被膜(biofilm)的形

成忙’；同时还能吸引巨噬细胞，加强吞噬作用，消除局部感

染，阻止病原的播散而达到治疗目的¨1。抗轮状病毒卵黄免

疫球蛋白主要是通过改变病毒表面的构型，阻止病毒吸附于

机体细胞以及增强巨噬细胞的吞噬作用H1。

2

IgY的开发现状

美国、日本、德国等在IgY研究开发中处于领先地位。Gallus immunotech、GenWay、IGY等公司致力于lgY的开发研究，并获得较为可观的经济效益和社会效益。美国雅臣药业集团(JasonMedicalHoldings，lnc．USA)是全球第一个将IgY技术产业化、商品化的公司。该公司有关IgY技术的技术发明专利有27项，研发成功并商品化的IgY系列产品共有22种。“奥丽汀健齿露”、“奥丽汀lgY免疫牙膏”、“免力快喉友喷剂”、“抗幽门杆菌和球菌复合IgY幽净胶囊”等已经投放市场并大量销售。国内lgY的研究开发也处于国际上较为领先的水平。湖南安邦制药有限公司主持的“卵黄抗体技术(IgY系列产品)深度开发”是2009年长沙市的重点项目之一，同时该公司引进国外IgY生物抗体技术，生产妇科用“瑞丽女人抑菌丹”第二代产品，开创了国内首家应用IgY生物制剂的绿色疗法治疗预防妇科疾病。“特异性抗CA IgY

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新璎制剂的研发与应用”是南昌大学产业化项目，已经对特

异性抗CA lgY泡腾片的药效作用，进行了临床前研究，并已

申请专利”J。大连赛姆生物工程技术公司的研究项目“lgY

在疾病防治方面的应用”已完成中试。目前，大量lgY已经

商品化。

2．1合lsY的功能性食品和保健品

美国食品和药品管理局(FDA)认为，lgY作为功能食品

比作为药物更有利，并将其列人“一般公认安全物质(Gen．

erally Accepted As Safe)”范畴，因此如同每日饮用牛奶一

样，消费者可放心食用卵黄抗体。lgY可以添加到婴幼儿、

中老年人的食品中，提高人体对各种疾病的抵抗力。用幽门

螺杆菌的致病物质尿酶免疫鸡制备lgY，经65℃巴氏消毒

30 min后添加到含有双歧杆菌和乳酸杆菌的酸奶中，终浓度

为1％。对42名经”c尿素呼气试验(UBT)确认为感染幽

门螺杆菌的患者服用该酸奶，每次150 mL(含lgY-尿酶15

mg)，3次／d，持续4周。试验组与未服用前相比UBT降低

了39．33％，对照组即没有添加IgY的酸奶服用组与未服用

前没有明显的差别【6 J。这种新型的酸奶作为营养食品已被

开发进行大规模的生产，已在日本、中国台湾、韩国等地

上市。

台湾华肝医药股份有限公司以专业化养鸡生产平台，成

功开发4种含有IgY的功能性食品：肠病毒71型IgY抗体、

常见肠道致病菌lgY抗体、引起蛀牙的转糖lgY抗体及绿脓

杆菌lgY、引起消化性溃疡的幽门螺杆菌IgY抗体。

江西中德联合研究院与葫芦岛爱克生物工程有限公司

运用现代免疫生物工程技术．从经轮状病毒免疫鸡卵黄中提

取并纯化的多种生物活性因子，采用冷冻干燥等工艺生产的

纯天然口服抗轮状病毒免疫球蛋白(商品名“百贝宁”)，从

2001年七市到现在，经临床试验发现“百贝宁”治疗轮状病

毒性肠炎疗效显著，服用方便，治疗过程中未发现毒副作

用‘”。

2．2舍IgY的消毒产品

美国雅臣药业集团和广东省大日生物化学药业有限公

司联合研制的用金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、B2溶血性

链球菌、G簇溶血性链球菌、肺炎球菌等细菌复合抗原免疫

的鸡蛋黄中提取特异性IgY，制成水溶性薄荷味喷雾剂(效

价为512)(商品名：喉友口腔抗菌液)，用于口腔和咽喉的

消毒。施建绒埔1将160例过敏性鼻炎患者随机分为试验组

和对照组，试验组每日用喉友口腔抗菌液喷鼻，对照组用抗

组胺药和雷诺考特鼻喷剂治疗。结果表明，用“喉友口腔抗

菌液”对过敏性鼻炎的总有效率达到86．25％。

还有添加lgY用于预防龋齿的“贝可丽健齿”喷剂以及

针对消灭或抑制各种导致妇科感染性疾病的细菌和霉菌的

“维洁斯”TM洁阴抑菌泡沫剂等消毒产品也已上市销售。

2．3基于IgY的分离检潮试荆盒

人血浆成分复杂，含有上万种蛋白质，其中自蛋白

(HSA)、IgG等12种高丰度蛋白占到了血浆总蛋白的90％

以上。高丰度蛋白的存在，影响血浆中一些低丰度蛋白的检

出，而这些低车度蛋白很可能是疾病治疗的靶标和诊断的标

志。获得HSA和IgG的特异性IgY。偶联于金磁微粒表面。

加入人血浆样品后，99％以上的抗体固定在金磁微粒表面，

取上清进行SDS—PAGE检测，该金磁微粒可有效的去除血浆

中大部分高丰度蛋白HSA及IgG—J。贝克曼库尔特公司利

用此技术开发出lgY蛋白质组份分离试剂盒：Proteome Lab

lgY．12和ProteoineLab lgY—R7，分别用于从人及其他灵长类

体液和啮齿动物体液中分离高丰度蛋白。GenWay是全球处

于领先地位的lgY抗体研发、生产和销售公司，提供大量鸡

抗体产品，特别是提供基于IgY的El。ISA各种试剂盒，用于

分析血浆和血清样品以及药物靶标的发现。

2．4其他产品

将IgY添加到化妆品中可抵制多种细菌和病毒，消除主

要细菌引起的痤疮，保护皮肤，如韩国“Acfine”系列产品。

还有将IgY添加到牙膏及口香糖中，预防和治疗龋齿。

3临床诊断和治疗性IgY

3．1诊断性IgY

IgY具有不与金色葡萄球菌A蛋白和链球菌G蛋白相

结合，不与哺乳动物Fc受体、类风湿因子结合，不与人抗或

鼠抗体交叉反应，不激活补体等特点。由于禽类和人亲缘关

系较远，种系差别大，使得lgY在检测诊断上具有稳定性、特

异性和灵敏度高、免疫干扰小、背景低等优点。因此，lgY已

应用于琼脂扩散试验、乳胶凝集试验、荧光免疫试验、ELISA、

免疫组化、胶体金标记等免疫学试验以检测病毒、细菌、寄生

虫感染以及心血管疾病和癌症。

3．1．1

病毒引起疾病的诊断 史继静等¨驯用纯化的编码

HIV·lgag p7、p6的前体蛋白NCpl5免疫蛋鸡，制备的IgY具

有较强的免疫反应性，能够与HIV·l病毒蛋白NCpl5特异

性结合，从而为HIV·1诊断试剂盒开发及HIV-1实验研究奠

定基础。核衣壳(NP)是SARS病毒的主要结构蛋白，病人

感染1周后，在病人的血浆和鼻明呼出物中大量出现。通过

克隆NP，免疫鸡获得NP特异性抗体，用于免疫检测分析，对

NP的检出限是10 pg／mL，是所用检测方法中最敏感的⋯1。

以3种灭活的天花病毒(vaccina virus，calpox virus和cowpox

virus)为免疫原，分别免疫注射3组实验蛋鸡制备抗体。用

特异性的IgY与磁珠结合，并在模拟样本中用于天花病毒的

PCR检测，可达到纯化病毒、增强实验敏感度的效果¨“。杨

军等¨川制备出针对乳头瘤病毒16 Ll蛋白(human papillo·

mavirusl6

type

L1 main

capsid protein，HPVl6 LI)的高效价特

异性lgY，可用于HPVl6LI蛋白的细胞学检测，为IgY抗体

在免疫组织化学检验中的应用提供实验依据。

3．1．2血吸虫病的诊断血吸虫病是一种严重危害人类健

康的人兽共患寄生虫病。以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(

SEA)免疫海南蛋鸡。制备IgY。以双抗体夹心酶联免疫吸附

试验(S-ELISA)法，检测急、慢性血吸虫病病人和健康人血

清，并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法(NEA-ELISA)

做比较显示S-ELISA法检测急性血吸虫病人循环抗原的阳

性率为100％，慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为

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84，4％，健康人的特异性为96％【l”。同时显示两种方法血

吸虫病的检出率差异无统计学意义。Lei等¨纠采用基于lgY

的免疫磁珠ELISA反应检测血浆中的循环抗原的量也可以

用来评价采用吡喹酮治疗后的效果。

3．1．3用于心血管疾病的诊断研究表明内源性畦巴因

(ouabain)与多种心血管疾病密切相关。但是。由于哇巴因

在机体内的含量极低，在正常人血浆中含量甚微，目前多选

用放射性免疫检测，存在放射性污染和试剂昂贵的缺点。利

用鸟类和哺乳动物的种系差别较大，将哇巴因．牛血清白蛋

白耦联物免疫蛋鸡制备IgY。可对哇巴因进行检测。结果表

明鸡抗体lgY比兔抗体IgG的检测特异性、准确性均高，在

一定程度上提高了哇巴因检测水平¨“。

3．1．4用于癌症的诊断HER2和端粒酶是乳腺癌诊断的

标志因子，用HER2和端粒酶免疫母鸡产生抗HER2和端粒

酶的卵黄抗体代替哺乳动物多抗进行检测，与哺乳动物的

lgG和IgM相比，IgY更加灵敏¨”。Xiao等【1引构建了IgY和

单壁碳纳米管(SWNT)复合物HER2 IgY—SWNT，其结合了

SWNT的共振拉曼散射及在700一l

100

nm近红外范围内很

强的吸收特征和IgY的特异性、敏感性，在体外能够专一性

检测和光热消融破坏HER2标志的乳腺癌细胞，有望成为新

的癌症检测和治疗手段。

3．2处于临床研究阶段的治疗性IgY

口服lgY用于被动免疫治疗，具有广阔的前景。目前多

数尚处于临床前和临床研究阶段。其中最成功的是治疗囊

性纤维化病(CF)lgY已完成II期临床试验，进入Ⅲ期临床。

慰17名瑞典病人口服抗铜绿假单胞菌IgY进行长达12年

的稿床治疗硅示出其具有良好的作用，而且口服对肺功能没

有影响，病人的体重指数值接近正常‘19]。Nilsson等Ⅲ1通过

观察1个口服lgY 10多年的临床病例指出长期口服特异性

抗铜绿假单胞菌lgY进行免疫治疗有效且没有任何的副作

用。抗铜绿假单胞菌[gY能够阻止铜绿假单胞菌的感染，但

存在全菌抗原和其他的细菌的交叉反应，有町能降低lgY的

治疗效果。以抗假单胞菌鞭毛抗原免疫获得IgY能够降低

假蕈胞菌的黏附，使病人的感染率和对抗生素的依赖降低，

同时抗鞭毛蛋白IgY也可以降低鞭毛蛋白引起的cF病人的

炎症反应”“。

采用低分化腺胃癌的P1lO癌蛋白作为抗原免疫SPF

鸡，从卵黄中提取抗体IgY作为蓖麻毒蛋白的导向载体制备

IgY·Ricin A。能够选择性地识别胃肠道系统肿瘤．诱导肿瘤

细胞的程序性死亡，最终杀死肿瘤细胞。IgY-Ricin A现已获

国家发明专利‘22]。

4

lgY的其他应用研究

IgY是一种较为理想的催化抗体旧“。采用过渡态类似

物4一(羟基(2-萘氧基)磷酰基)丁酸(HNPBA)为半抗原，和

BSA偶联为全抗原免疫鸡，制备IgY，以乙酸-2一萘酯为底物

验证其催化活性，测得Kcat／Kuncat一2×104。显示IgY具有

较高的催化活性。IgY用胰蛋白酶消化后，其(Fab’)片段的

催化活性与lgY相似。IgY还可以作为亲和配基，用于分离

纯化抗原。将纯化后的抗BSA特异性IgY为介质亲和分离

胎牛血清中的BSA，分离后的BSA纯度可达电泳l条带，明

显高于市售产品‘圳。

目前对于lgY的规模化生产和临床应用，还有许多问题

尚待解决，如生产工艺的稳定性、质量标准的制定、口服lgY

在体内的动力学研究、口服制剂在胃肠道中的稳定性等。随

着对lgY研究的不断深入和IgY生产技术的发展，IgY的应

用前景将越来越广阔，有可能成为一类新型的生化药物。

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